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实验技术与服务

免疫共沉淀(Co-IP)

免疫共沉淀(Co-IP)

Co-IP技术,是用于检测蛋白质相互作用的一种方法。该实验基于免疫学原理,利用与目标蛋白质特异性结合的抗体对其进行识别和富集。当目标蛋白质和其配体或互作伴侣结合在一起时,进一步顺利获得洗涤、洗脱和分析等步骤,以便完全确定目标蛋白质和其互作伴侣的身份和相互作用模式。 Co-IP实验是一种常用的蛋白质分析方法,在生物医学和基础研究中具有广泛应用价值。该方法可以用于研究蛋白质相互作用及其互作位点、信号转导途径、细胞周期、疾病机制、病原及药物靶点等方面的问题。
染色质免疫共沉淀(Chip)

染色质免疫共沉淀(Chip)

染色质免疫沉淀技术(ChIP)是一种在检测与特异性蛋白质结合的DNA片段,以探究特异性蛋白质与DNA相互作用的技术,通常用于研究转录因子与基因启动子结合位点或组蛋白特异性修饰位点。其基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并将其打碎成一定大小的片段,然后用特异性抗体免疫沉淀目标蛋白与DNA 交联的复合物,顺利获得对目的片段进行纯化和检测,取得DNA 与蛋白质相互作用的序列信息。
蛋白邻近标记技术(PL)

蛋白邻近标记技术(PL)

邻近标记技术(Proximity labeling, PL)将目的蛋白与生物素连接酶TurboID融合表达,利用生物素连接酶将空间上靠近目的蛋白的猎物蛋白进行生物素化,然后利用生物素对猎物蛋白进行标记,利用链霉亲和素磁珠富集猎物蛋白,并顺利获得质谱方法对富集蛋白进行鉴定。该技术是传统AP-MS的补充和革新,可探索大量潜在未知的瞬时和微弱互作景观。
蛋白邻近连接技术(PLA)

蛋白邻近连接技术(PLA)

蛋白邻近连接技术(Proximity Ligation Assay, PLA)是一种用于检测和定量细胞内蛋白质相互作用的强大工具。利用特异性抗体与目标蛋白质结合,并顺利获得一对特定的DNA探针实现邻近连接。当目标蛋白质在细胞内空间位置相互邻近时,这些DNA探针会结合到同一复合物上,从而形成一个环状结构。接着,顺利获得滚环扩增(rolling circle amplification, RCA)方法扩增该DNA,增强信号,而后利用荧光定量PCR进行定量或利用荧光标记的核酸探针进行显色,从而实现对蛋白质相互作用的定量检测分析。
RNA免疫共沉淀(RIP)

RNA免疫共沉淀(RIP)

RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术。分析与目的蛋白结合的RNA.运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行分析;即用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白,防止非特异性的RNA的结合,免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来,而后顺利获得二代测序筛选靶基因或者顺利获得qPCR验证兴趣基因。RIP技术是研究细胞内RNA 与蛋白结合情况的技术,是分析转录后调控网络动态过程的有力工具,可以协助j9旗舰厅官网分析RNA结合蛋白(如AGO2、RNA甲基化酶等)在特定环境下对靶基因的调控作用。
双荧光素酶报告实验

双荧光素酶报告实验

基于荧光素酶(luciferase)的发光原理,科学家发明了双荧光素酶报告基因检测系统。该系统包括萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)和海肾荧光素酶(Renilla luciferase)。两者可催化各自的底物发生氧化作用产生生物荧光,产生的荧光数值大小即表示了两种酶的表达量多少。其通常以萤火虫荧光素酶为报告基因,以海肾荧光素酶为内参基因。所构成的报告系统具有灵敏度高、动态范围广、应用灵活等优势,广泛应用于基因调控、非编码RNA靶向互作、信号转导、转录因子转录活性、SNP活性分析等研究领域。
DNA pull down

DNA pull down

> DNA pull-down是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上,再与细胞的核蛋白孵育,纯化出与DNA片段互作的蛋白,洗涤洗脱得到的蛋白产物,做western-blot检测特定蛋白是否与靶DNA片段结合; > DNA pull-down是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上,再与细胞的核蛋白孵育,纯化出与DNA片段互作的蛋白,洗涤洗脱得到的蛋白产物,做western-blot检测特定蛋白是否与靶DNA片段结合;
RNA pull down

RNA pull down

RNA pull down技术是一个非常经典的以RNA为研究对象,寻求互作蛋白的技术。其技术原理是,体外转录或化学合成获取目标RNA,对RNA末端进行生物素标记制备探针,而后将标记生物素的RNA与蛋白裂解液进行孵育,获取探针-蛋白复合物,而后利用链霉亲和素磁珠结合探针-蛋白复合物,洗脱非特异性蛋白后,western-blot检测特定蛋白或者质谱鉴定复合物中蛋白成分。
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